臍帶血單個(gè)核細(xì)胞分離方法和注意事項(xiàng)

單個(gè)核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與其它細(xì)胞不同，在沉降過程中不同比重的細(xì)胞會處于不同的分布位置。因此，可利用各種血細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞比重之間的差異將各種血細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞分離開來。

1）  取新鮮抗凝臍帶血，按照1：1比例加入RPMI 1640培養(yǎng)基，將血液進(jìn)行稀釋（以降低血液粘稠度），輕柔混勻，備用。

2）  向無菌離心管內(nèi)加入適量的單個(gè)核細(xì)胞分離液，將稀釋后的臍帶血平鋪到分離液液面上方（分離液：稀釋臍帶血=1：2），保持兩液面界面清晰。

3）  800g，室溫，離心 20min-30min（注：設(shè)置較慢的加速度和減速度，如果有十檔，設(shè)為第三檔）。

4）  離心結(jié)束后，吸棄血漿層，小心吸取CBMC層（即白膜層）并轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。離心結(jié)束后，管內(nèi)液面從上至下依次為稀釋血漿層、CBMC層、分離液層和紅細(xì)胞層（見圖1）。

5）  向離心管中加入10mL 的RPMI 1640培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞，250g，室溫離心 10min ，棄上清。重復(fù)該步驟 1~2 次，即可用于后續(xù)試驗(yàn)。

1）  血液新鮮程度是影響分離效果的關(guān)鍵因素，請盡量使用采集后24h內(nèi)的血液進(jìn)行CBMC分離。

2）  為保證細(xì)胞的活力，整個(gè)操作過程請輕柔，避免對細(xì)胞造成機(jī)械性的損傷。

3）  為保持細(xì)胞狀態(tài)良好，請盡量縮短整個(gè)試驗(yàn)的周期。

IPHASE/匯智和源針對人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞分離的特點(diǎn)，開發(fā)了人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞分離試劑盒。該試劑盒包含單個(gè)核細(xì)胞分離液和洗滌液兩個(gè)組分，各成分對細(xì)胞無毒性，不會影響細(xì)胞的原始狀態(tài)；同時(shí)，該試劑盒操作簡單便捷，可大大縮短細(xì)胞分離時(shí)間，分離所得細(xì)胞純度高、狀態(tài)好、得率高。